Молекулярное клонирование, гетерологическая экспрессия и получение соматотропина человека
https://doi.org/10.29235/1561-8331-2019-55-2-182-187
Аннотация
Соматотропин – гормон пептидной природы, синтезирующийся в передней доле гипофиза и усиливающий пролиферацию клеток и рост организма. В результате проведенного исследования разработана конструкция для периплазматической экспрессии рекомбинантного соматотропина человека на основе плазмиды pNic, подобраны условия для периплазматической бактериальной экспрессии (42 ч, 30 °С), способы выделения и очистки препарата целевого белка, не содержащего гистидинового кластера. Получен препарат целевого белка высокой степени очистки и соответствующего природному по молекулярной массе (MW 22301,9 Да). Общее количество полученного рекомбинантного соматотропина человека составило 2,85 мг на литр среды.
Ключевые слова
Об авторах
А. М. Горькавая
Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси
Беларусь
Беларусь
Горькавая Анна Михайловна – науч. сотрудник
ул. Купревича, 5/2, 220141, Минск
А. А. Гилеп
Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси
Беларусь
Беларусь
Гилеп Андрей Александрович – канд. хим. наук, вед. науч. сотрудник
ул. Купревича, 5/2, 220141, Минск
Г. В. Сергеев
Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси
Беларусь
Беларусь
Сергеев Геннадий Валерьевич – канд. хим. наук, зав. лаб.
ул. Купревича, 5/2, 220141, Минск
Список литературы
1. Lewis, U. J. Structure and Properties of Members of the hGH Family: A Review / U. J. Lewis, Y. N. Sinha, G. P. Lewis // Endocrine Journal. – 2000. – Vol. 47. – P. 1–8. https://doi.org/10.1507/endocrj.47.supplmarch_s1
2. Lindholm, J. Growth hormone: Historical notes / J. Lindholm // Pituitary. – 2006. – Vol. 9, No 1. – P. 5–10. https://doi.org/10.1007/s11102-006-7557-4
3. Growth hormone isoforms and segments/fragments: Molecular structure and laboratory measurement / E. F. De Palo [et al.] // Clinica Chimica Acta. – 2006. – Vol. 364. – P. 67–76. https://doi.org/10.1016/j.cca.2005.06.009
4. Dalbey, R. E. Leader peptidase / R. E. Dalbey // Molecular Microbiology. – 1991. – Vol. 5, No 12. – P. 2855–2860. https://doi.org/10.1111/j.1365–2958.1991.tb01844.x
5. Paetzel, M. Structure and mechanism of Esherichia coli type I signal peptidase / M. Paetzel // Biochim. Biophys. Acta. – 2014. – Vol. 1843. – P 1497–1508.
6. Sockolosky, J. T. Periplasmic production via the pET expression system of soluble, bioactive human growth hormone / J. T. Sockolosky, F. C. Szoka // Protein Expression and Purifcation. – 2013. – Vol. 87, No. 2. – P. 129–135. https://doi.org/10.1016/j.pep.2012.11.002
7. High-level expression and purifcation of recombinant human growth hormone produced in soluble form in Escherichia coli / Z. Levarski [et al.] // Protein Expression and Purifcation. – 2014. – Vol. 100. – P. 40–47. https://doi.org/10.1016/j.pep.2014.05.003
8. Chang C. N., Rey M., Bochner B., Heyneker H., Gray G. High-level secretion of human growth hormone by Escherichia coli / C. N. Chang [et al.] // Gene. – 1987 – Vol. 55, No 2–3. – P. 189–196. https://doi.org/10.1016/0378-1119(87)90279-4
9. Горькавая, A. M. Молекулярное клонирование, гетерологическая экспрессия и получение рекомбинантного соматотропина G. Gallus / A. M. Горькавая, Г. В. Сергеев, A. A. Гилеп // Вес. Нац. акад. навук Беларусі. Сер. хім. навук. – 2016. – № 2. – P. 76–82.
Рецензия
Просмотров: 970
Послать статью по эл. почте 