СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ВОССТАНОВЛЕНИЯ CYP124 M. TUBERCULOSIS РАЗЛИЧНЫМИ РЕДОКС-ПАРТНЕРАМИ

С целью определения оптимальных редокс-партнеров CYP124 M. tuberculosis в in vitro реконструированной системе осуществлена гетерологическая экспрессия, выделение и очистка рекомбинантных цитохрома CYP124 M. tuberculosis и потенциальных редокс-партнеров: Fdx, FdR, FprA, Adx, AdR, CPR, Arh1_A18G, Etpfd. Показано, что CYP124 проявляет наибольшую каталитическую активность в системе с митохондриальными электрон-транспортными белками S. pombe: Etp1fd и Arh1_A18G.

цитохромы Р450, редокс-партнеры, туберкулез, гетерологическая экспрессия

1. Структурный анализ цитохромов Р450 микобактерий комплекса Mycobacterium tuberculosis / А. В. Василевская [и др.] // Докл. Нац. акад. наук Беларуси. – 2010. – Т. 54, № 5. – С. 55–59.

2. Identification of Mycobacterium tuberculosis enzyme involved in vitamin D and 7-dehydrocholesterol metabolism / A. V. Vasilevskaya [et al.] // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. – 2017. – Vol. 169. – P. 202–209. DOI: 10.1016/j.jsbmb.2016.05.021

3. The endogenous adrenodoxin reductase-like flavoprotein arh1 supports heterologous cytochrome P450-dependent substrate conversions in Schizosaccharomyces pombe / K. M. Ewen [et al.] // FEMS Yeast Res. – 2008. – Vol. 8, № 3. – P. 432–441. DOI: 10.1111/j.1567-1364.2008.00360.x

4. Structural and thermodynamic characterization of the adrenodoxin-like domain of the electron-transfer protein Etp1 from Schizosaccharomyces pombe / J. J. Müller [et al.] // J. Inorg. Biochem. – 2011. – Vol. 105, № 7. – P. 957–965. DOI: 10.1016/j.jinorgbio.2011.04.001

5. Цитохром Р450124 Mycodacterium tuberculosis: лиганд-связывающие и каталитические свойства / А. В. Василевская [et al.] // Вес. Нац. акад. навук Беларусі. Сер. хім. навук. – 2011. – № 3. – С. 107–112.

6. Structural basis for pregnenolone biosynthesis by the mitochondrial monooxygenase system / N. Strushkevich [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 2011. – Vol. 108, № 25. – P. 10139–10143. DOI: 10.1073/pnas.1019441108

7. Engineering of proteolytically stable NADPH-cytochrome P450 reductase / T. A. Bonina [et al.] // Biochemistry (Moscow). – 2005. – Vol. 70, № 3. – P. 357-365. DOI: 10.1007/s10541-005-0122-3

8. pET System Manual / Novagen. – 11th Ed. – Darmstadt: EMD Biosciences, Inc., 2005. – 80 p.

9. Characterization and catalytic properties of the sterol 14alpha-demethylase from Mycobacterium tuberculosis / A. Bellamine [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1999. – Vol. 96, № 16. – P. 8937-8942. DOI: 10.1073/pnas.96.16.8937

10. Mycobacterium tuberculosis FprA, a novel bacterial NADPH-ferredoxin reductase / F. Fischer [et al.] // Eur. J. Biochem. – 2002. – Vol. 269, № 12. – P. 3005–3013. DOI: 10.1046/j.1432-1033.2002.02989.x

11. Murataliev, M. B. Electron transfer by diflavin reductases / M. B. Murataliev, R. Feyereisen, F. A. Walker // Biochim. Biophys. Acta – 2004. – Vol. 1698, № 1. – P. 1–26. DOI: 10.1016/j.bbapap.2003.10.003