Субстратная специфичность рекомбинантной стероид 21-гидроксилазы человека и влияние цитохрома b5 на ее активность
Аннотация
Цитохром CYP21 человека (стероид 21-гидроксилаза) был экспрессирован в клетках Escherichia coli DH5α (экспрессионный уровень составил 150 нмоль белка на 1 литр культуральной среды). Использование двух последовательных колоночных хроматографий позволило получить белок высокой степени очистки, обладающий специфической 21-гидроксилазной активностью по отношению к прогестерону, 17α-гидроксипрогестерону и 11-гидрокси-прогестерону. В данной работе проводился скрининг стероидов как потенциальных субстратов для белка. Впервые доказано, что 11-гидроксипрогестерон является эндогенным субстратом CYP21. Показано, что цитохром b5, в отличие от его эффекта на CYP17A1, не оказывает влияния на 21-гидроксилазную активность CYP21 по отношению к прогестерону, 11-гидроксипрогестерону и 17-гидроксипрогестерону, что свидетельствует о разных механизмах регуляции двух изоформ цитохрома Р450 в мембранах эндоплазматического ретикулума коры надпочечников.
Об авторах
В. А. Копоть
Институт биоорганической химии НАН Беларуси
Беларусь
Беларусь
Г. В. Сергеев
Институт биоорганической химии НАН Беларуси
Беларусь
Беларусь
А. А. Гилеп
Институт биоорганической химии НАН Беларуси
Беларусь
Беларусь
С. А. Усанов
Институт биоорганической химии НАН Беларуси
Беларусь
Беларусь
Список литературы
1. Schenkman J. В., Jansson I. // Pharmacology & Therapeutics. 2003. N 97. P. 139-152.
2. Payne A. H, Hales D. B. // Endocr. Rev. 2004. Vol. 25, N 6. P. 947-970.
3. Zhao B. et al. // The journal of biological chemistry. 2012. Vol. 287, N 13. P. 10613-10622.
4. Payne A. H., Hales D. B. // Endocr. Rev. 2004. Vol. 25, N 6. P. 947-970.
5. Reisch N., Arlt W., Krone N. Health Problems in Congenital Adrenal Hyperplasia due to 21-Hydroxylase Deficiency. Horm Res Paediatr. 2011. N 76. P. 73-85.
6. Arase M. et al. // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2006. N 344. P. 400-405.
7. Kominami S. et al. The role of cytochrome b5 in adrenal microsomal steroidogenesis. 1992. Vol. 42, N 1. P. 57-64.
8. Sergeev G. V., Gilep A. A., Usanov S. A. // Biochemistry (Moscow). 2014. Vol. 79, N 5. P. 406-416.
9. Gilep A. A., Sushko T. A., Usanov S. A. // Biochimica et Biophysica Acta. 2011. N 1814. P. 200-209.
10. Harnastai IN, Gilep A. A., Usanov S. A. // Protein expression and purification. 2006. N 46. P. 47-55.
11. Meng-Chun Hu, Bon-chu Chung // Molecular Endocrinology. 1990. Vol. 4, N 6. P. 893-898.
12. Guzov V. M. et al. // Biokhimiia (Moscow). 1996. Vol. 61, N 10. P. 1758-1771.
13. Schroer K., Kittelmann M., Luts S. // Biotechnology and Bioengineering. 2010. Vol. 106, N 5. P. 699-706.
14. Katagiri M. et al. // Biochemical and biophysical research communications. 1982. Vol. 108, N 1. P. 379-384.
15. Tabas S. et al. // Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 2011. Vol. 125. P. 23-31.
16. Akhtar M. K., Kelly S. L., Kaderbhai M. A. //. J. Endocrnol. 2005. Vol. 187, N 2. P. 267-274.
17. Yamaori S. et al. Effects of cytochrome b(5) on drug oxidation activities of human cytochrome P450 (CYP) 3As: similarity of CYP3A5 with CYP3A4 but not CYP3A7. Biochemical Pharmacology, 2003. N 66, P. 2333-2340.
18. Yamazaki H. et al. // Protein Expression and Purification. 2002. N 24 P. 329-337.
19. Zehentgruber D. et al. // Journal of biotechnology. 2010. N 146. P. 179-185.
20. Sushko T. A., Gilep A. A., Usanov S. A. // Biochemistry (Moscow). 2012. Vol. 77, N 6. P. 585-592.
21. Guryev O. L. et al. // Biochemistry. 2001. N 40. P. 5018-5031.
Рецензия
Просмотров: 573
Послать статью по эл. почте 