СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ВОССТАНОВЛЕНИЯ CYP124 M. TUBERCULOSIS РАЗЛИЧНЫМИ РЕДОКС-ПАРТНЕРАМИ

С целью определения оптимальных редокс-партнеров CYP124 M. tuberculosis в in vitro реконструированной системе осуществлена гетерологическая экспрессия, выделение и очистка рекомбинантных цитохрома CYP124 M. tuberculosis и потенциальных редокс-партнеров: Fdx, FdR, FprA, Adx, AdR, CPR, Arh1_A18G, Etpfd. Показано, что CYP124 проявляет наибольшую каталитическую активность в системе с митохондриальными электрон-транспортными белками S. pombe: Etp1fd и Arh1_A18G.

цитохромы Р450, редокс-партнеры, туберкулез, гетерологическая экспрессия

1. Структурный анализ цитохромов Р450 микобактерий комплекса Mycobacterium tuberculosis / А. В. Василевская [и др.] // Докл. Нац. акад. наук Беларуси. - 2010. - Т. 54, № 5. - С. 55-59.

2. Identification of Mycobacterium tuberculosis enzyme involved in vitamin D and 7-dehydrocholesterol metabolism / A. V. Vasilevskaya [et al.] // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. - 2017. - Vol. 169. - P. 202-209. https://doi.org/10.1016/j.jsbmb.2016.05.021

3. The endogenous adrenodoxin reductase-like flavoprotein arh1 supports heterologous cytochrome P450-dependent substrate conversions in Schizosaccharomyces pombe / K. M. Ewen [et al.] // FEMS Yeast Res. - 2008. - Vol. 8, № 3. - P. 432-441. https://doi.org/10.1111/j.1567-1364.2008.00360.x

4. Structural and thermodynamic characterization of the adrenodoxin-like domain of the electron-transfer protein Etp1 from Schizosaccharomyces pombe / J. J. Müller [et al.] // J. Inorg. Biochem. - 2011. - Vol. 105, № 7. - P. 957-965. https://doi.org/10.1016/j.jinorgbio.2011.04.001

5. Цитохром Р450124 Mycodacterium tuberculosis: лиганд-связывающие и каталитические свойства / А. В. Василевская [et al.] // Вес. Нац. акад. навук Беларусі. Сер. хім. навук. - 2011. - № 3. - С. 107-112.

6. Structural basis for pregnenolone biosynthesis by the mitochondrial monooxygenase system / N. Strushkevich [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2011. - Vol. 108, № 25. - P. 10139-10143. https://doi.org/10.1073/pnas.1019441108

7. Engineering of proteolytically stable NADPH-cytochrome P450 reductase / T. A. Bonina [et al.] // Biochemistry (Moscow). - 2005. - Vol. 70, № 3. - P. 357-365. https://doi.org/10.1007/s10541-005-0122-3

8. pET System Manual / Novagen. - 11th Ed. - Darmstadt: EMD Biosciences, Inc., 2005. - 80 p.

9. Characterization and catalytic properties of the sterol 14alpha-demethylase from Mycobacterium tuberculosis / A. Bellamine [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1999. - Vol. 96, № 16. - P. 8937-8942. https://doi.org/10.1073/pnas.96.16.8937

10. Mycobacterium tuberculosis FprA, a novel bacterial NADPH-ferredoxin reductase / F. Fischer [et al.] // Eur. J. Biochem. - 2002. - Vol. 269, № 12. - P. 3005-3013. https://doi.org/10.1046/j.1432-1033.2002.02989.x

11. Murataliev, M. B. Electron transfer by diflavin reductases / M. B. Murataliev, R. Feyereisen, F. A. Walker // Biochim. Biophys. Acta - 2004. - Vol. 1698, № 1. - P. 1-26. https://doi.org/10.1016/j.bbapap.2003.10.003